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薄層層析板常用制備方法供參考

更新時間:2016-03-16      點擊次數:2359
這是實驗室和檢驗室薄層層析板常用的制備方法之一,供大家參考。
 
薄層層析板制備方法有很多,有手工的,也有機械的。如果薄層層析板用量較少,可以用手工的,如果用量較大,還是用機械的更加方便快捷! 
 
下面先介紹一下薄層層析板配置方法:
  1. 鋪板:手動或機械。手動鋪出的板的薄厚與所加的混合后的硅膠量有關,而機械鋪出的板的薄厚與機械所選用的鋼板有關,可根據需要來定。但此過程中zui關鍵的是板子邊緣鋪得好壞,手動鋪板一定要將玻璃板邊緣硅膠涂勻(我習慣用兩頭掂法,即板下方的中間墊一物體,兩頭懸空,兩手均勻掂動)。而機械鋪板要注意板與板之間平整性,或者由高到低排列。
  2. 晾干:自然晾干。
  3. 活化:將晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min,取出,放入干燥器中,備用。
  4. CMC-Na溶液的配置:一般其濃度為0.3~0.5%,根據自己經驗而定(我習慣用0.4%的)。具體方法如下:先將預用的水加熱至60~70℃,然后加入CMC-Na,邊加邊攪拌,使之溶解,即得。
  5. 與硅膠混合:CMC-Na溶液與硅膠的比例為3:1。具體方法如下:先將CMC-Na溶液倒入自動攪拌器或研缽中,然后加入硅膠,攪勻即可。若是在研缽中研磨,按一個方向研磨,自下而上,然后自上而下,以趕盡氣泡為佳。
 
薄層層析板鋪板
    鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀:過稠,板容易出現拖動或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間,根據經驗來定,與空氣濕度有關,一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,也影響板涂層的厚度,進一步影響上樣量。涂層薄,點樣易過載;涂層厚,顯色不那么明顯。通常,板的質量對薄層鑒別的影響不是很大,影響zui大的是展開劑的配制和展開系統的飽和。
 
點樣
    盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性,只用1微升的點樣管。這樣,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干。
 
展開劑配制
    選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑,會造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務有不同的要求,盡量達到實驗室儀器的zui高度,比如:取1ml的溶劑,應使用1ml的單標移液管,移液管應符合計量認證要求,盡管多數時候這不是必須的。
 
展開系統的飽和
    一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺,斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達到飽和,防止邊沿效應,飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當然動作應該盡量輕、快。 
 
溫濕度的控制
    溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計主要是影響薄層板的吸附能力,導致選擇性(容量因子)的變化,濕度應根據實際情況確定。溫度控制使用空調器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸。
 
薄層層析板顯色
    噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。
 
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